التنقية الجزئية لأنزيم الكلوتاميت ديهايدروجينيز من كالس سيقان نبات الحبة السوداء (L. Nigella sativa) بوجود 2,4- D أو PDA

شملت الدراسة استحداث ونمو كالس سيقان نبات الحبة السوداء على وسط موراشيج وسكوك (MS) الصلب المضاف إليه 6- 1010 10 مولار من حامض 2،4- ثنائي كلوروفينوكسي حامض الخليك (2,4-D) أو 6- 1010 10 مولار من حامض بنتاداينويك (PDA) ودراسة عزل وقياس فعالية أنزيم كلوتاميت ديهايدروجينيز (GDH) من الكالس المستحدث على الوسط الغذائي فضلاً عن مقارنة فعاليته بوجود المنظم القياسي 2,4-D أو PDA المحضر مختبرياً. 1010 وبلغ الوزن الطري للكالس النامي على وسط MS الصلب المضاف اليه2,4-D بمقدار5.72 غراماً مقارنة بمقدار 2.81 غراماً بوجود PDA بعد 45 يوماً من الزراعة. وبلغت الكمية الكلية للبروتين من الكالس النامي على الوسط المضاف إليه 2,4-D أو PDA مقدار1.050 و1.116 ملي غرام /غرام وزن طري على التوالي.ووجد أن الفعالية النوعية لأنزيم GDH ازدادت بعد كل خطوة من خطوات التنقية وبلغ عدد مرات التنقية 23 مرة وكذلك بعد تحديد الظروف المثالية لفعاليته. وتطلب ذلك استخدام المحلول المنظم Tris-HCl بتركيز 100 ملي مولار وبدالة حامضية 8.6 و 30 مايكرومولار من حامض الكلوتاميك ومايكرومولار واحد من نيكوتين اميد ادنين ثنائي النيوكليوتيد (NAD) و20 مايكروغرام من الأنزيم وبدرجة حرارةº 35 م. وبلغت قيمة ثابت ميكيلس – منتن (Km) للكلوتاميت مقدار 27 مايكرومولار باستخدام رسم لاينويفر- بيرك.وأشارت النتائج إلى أن الفعالية النوعية لأنزيمGDH المستخلص من كالس نبات الحبة السوداء النامي على الوسط الغذائي المضاف إليه 2,4-D أو PDA بلغت مقدار 21.3 و22.3 مايكرومولار / دقيقة/ ملي غرام بروتين على التوالي وبالظروف المثالية. ووجد كذلك أن قيمة الوزن الجزيئي التقريبي باستخدام الترشيح الهلامي مقدار 302000 دالتون. وأعتماداً على نتائج هذه الدراسة يمكن القول إن مركب PDA يمكن أن يستخدم بدلاًعن 2,4-D في تقانة زراعة الأنسجة النباتية للحبة السوداء وإنه عمل بصورة مشابهة إلى حد ما لعمل الأوكسينات القياسية المصنعة. ويمكن أن يعد على أنه أوكسين محضر مختبرياً ويمكن استخدامه في أنظمة زراعة الأنسجة النباتية للعديد من النباتات.