عزل إنزیم برولایدیز من السائل الأمنیونی ودراسة صفاته الحرکیة وألفته تجاه المرکبات الدوائیة

تضمن البحث عزل إنزیم برولایدیز من سائل الأمنیونی باستعمال التقنیات الحیاتیة المختلفة، اذ تم عزل قمة بروتینیة واحدة بتقنیة الترشیح الهلامی نوع سیفادکس G-50 ونوع سیفادکس G-100 للراسب البروتینی الناتج من عملیة الترسیب بکبریتات الامونیوم (60%) بعد عملیة الفرز الغشائی. وقدر الوزن الجزیئی التقریبی للإنزیم باستعمال تقنیة الترشیح الهلامی نوع (G-100) التی کانت بحدود 52269.7 دالتون، وبلغت فعالیته النوعیة 13516.6 وحدة إنزیم/ملغم من البروتین ذی عدد مرات تنقیة وصلت 75 مرة. أظهرت النتائج أن الظروف المثلى للإنزیم المنقى من سائل الأمنیونی عند استعمال ترکیز 50 مایکروغرام/مل للبروتین کمصدر للإنزیم باستعمال المحلول المنظم ترس- حامض الهیدروکلوریک بترکیز60 ملی مول/لتر وعند أس هیدروجینی 8.0 وزمن تفاعل 32 دقیقة ودرجة حرارة 39°م. وباستعمال رسم (لاین ویفر– برک) تم إیجاد قیمة السرعة القصوى (Vmax) وثابت میکیلس (Km) التی کانت مساویة لـ3448.2  وحدة إنزیم/لتر و10 ملی مول/لتر على التوالی عند استعمال مادة الأساس نوع کلایسین-برولین (Gly-Pro).  وأخیراً تم دراسة تأثیر بعض المرکبات الکیمیائیة الدوائیة على فعالیة الإنزیم، وبینت النتائج أن المرکبات الکیمیائیة الدوائیة من السیرامید ومیتوکلوبرامید وبسیدوفیدرین ودای فیهایدرامین-هایدروکلوراید وکلورامفینکول وباراسیتامول وألوبیرانول اعطوا تثبیطاً من نوع التنافسی، الذین کانت لهم زیادة فی قیمة Km  وصلت الى 66.6، 71.42، 52.63، 55.55، 83.33، 90.9، 100.0 ملی مول/لتر على التوالی للمثبطات اعلاه، اما المرکبات الدوائیة من نوع ثیوفیلین وکافایین ومیترونیدازول وکلورفینیرامین مالیت اعطوا تثبیطاً من النوع غیر التنافسی، ووصل الانخفاض فی قیمة Vmax للمثبطات من هذا النوع الى 2173.9، 2439.0، 2000.0 و 2325.58 وحدة إنزیم/لتر على التوالی، ولکن لوحظ ان الدکساثامازون منشط للإنزیم وبمقدار 27.18 وحدة إنزیم/لتر.